Muestreo por ablación láser ultravioleta profunda para el análisis proteómico de tejidos

Se utilizó la ablación láser ultravioleta profunda con un láser excimer ArF pulsado de 193 nm para extraer áreas localizadas de secciones de tejido de las que se han extraído proteínas para la evaluación proteómica resuelta espacialmente por cromatografía líquida en tándem de espectrometría de masas (LC-MS/MS).

La flexibilidad para capturar proteínas intactas mediante la ablación a 193 nm de longitud de onda se verificó mediante la ionización por desorción láser asistida por matriz (MALDI) de la proteína habitual albúmina de suero bovino (BSA), que confirmó que la BSA se ablaba y capturaba sin fragmentación.

Un ensayo Bradford de las proteínas ablacionadas y capturadas indicó una eficacia del 90% para el cambio de la proteína intacta a una fluencia láser de tres kJ/m2. Las secciones de tejido mental de rata montadas en portaobjetos de cuarzo y ablacionadas en modo de transmisión produjeron 2 μg de proteína por mm2, cuantificados por el ensayo de Bradford.

Se han ablacionado áreas de tejido de entre 0,06 mm2 y 1 mm2 y se han recogido los materiales expulsados para su evaluación proteómica. Las proteínas extraídas se han digerido y los péptidos resultantes se han analizado por LC-MS/MS.

Las proteínas extraídas de las zonas ablacionadas han sido reconocidas y la variedad común de proteínas reconocidas osciló entre 85 en el espacio de 0,06 mm2 y 2400 en el espacio de 1 mm2 de un tejido de 50 μm de espesor.

En comparación con la ablación por láser infrarrojo de áreas iguales muestreadas, cada masa de proteínas y variedad de proteínas reconocidas utilizando el muestreo de ablación por láser DUV han sido aproximadamente 4 instancias más grandes.
El ácido glicirrícico elimina las especies reactivas de carbonilo y atenúa la modificación de las proteínas inducida por la glicación: Una investigación in vitro e in silico
El presente examen está orientado a descubrir el impacto inhibidor del ácido glicirrícico (AG) en la glicación de proteínas mediada por la D-ribosa a través de diversos análisis fisicoquímicos y enfoques in silico.

El ácido glicirrícico, que es un potente eliminador de radicales libres y una saponina triterpenoide, desempeña una importante función en la disminución del estrés oxidativo y, por tanto, podría ser un eficaz inhibidor del proceso de glicación no enzimática.

Nuestra información confirmó que varias concentraciones de GA inhibió la BSA-AGEs in vitro a través de la inhibición de la formación de fructosaminas, fluorescente AGEs, barrido de proteínas de carbonilo y el contenido de hidroximetil furfural (HMF), y la seguridad en la oposición a la D-ribosa inducida por la modificación de la BSA, como es evidente por la elevación de Arg libre y residuos de Lys en GA-tratados Gly-BSA muestras.

Además, el GA también atenuó las alteraciones inducidas por la D-ribosa en la construcción secundaria de la BSA, defendiendo los conformadores de la α-hélice y la β-hoja y la deslocalización de la banda amida-I.

Así como, GA atenuado la modificación en β-cross amiloide construcciones de BSA y en silico molecular interplay examinar también confirmó robusta vinculación de GA con mayor variedad de Lys y Arg residuos de BSA y la vitalidad de unión de -8.

Ocho Kcal / mol, en comparación tanto a la referencia común aminoguanidina (AG) -BSA complicado o D-ribosa-BSA complicado. Por lo tanto, GA podría ser un nuevo y favorable inhibidor de la glicación no enzimática curso de que mejora los problemas relacionados con los AGE a través de la atenuación de la formación de AGE y la glicación inducida por una serie de modificaciones de la proteína con una menor amenaza de los resultados adversos en la construcción de proteínas y el rendimiento;

por lo tanto, posiblemente podría ser investigado en entornos preclínicos adicionales para la terapia y la administración de la diabetes y los problemas asociados a la edad.

Biosensor electroquímico con funcionalidad antiincrustante mejorada basado principalmente en albúmina de suero bovino de tipo amiloide y un polímero conductor para la detección ultrasensible de proteínas en suero humano

El biofouling ha sido una carga considerable en la evaluación de biomarcadores en medios orgánicos complicados, lo que ha dado lugar a una sensibilidad y selectividad pobres e incluso a un mal funcionamiento de las unidades de detección.

En este trabajo, se fabricó un biosensor electroquímico con una magnífica capacidad antiincrustante y una excesiva estabilidad, basado principalmente en la albúmina de suero bovino de tipo amiloide (AL-BSA) reticulada con el polímero conductor polianilina (PANI).

A diferencia de la albúmina de suero bovino (BSA) reticulada, la AL-BSA reticulada mostró una mayor funcionalidad antiincrustante, y fue capaz de crear una película antiincrustante eficaz en un tiempo de respuesta considerablemente rápido.

Con la inmovilización adicional de anticuerpos de inmunoglobulina M (IgM) en el suelo de AL-BSA listo a través de la formación de enlaces de amida, se construyó un biosensor electroquímico capaz de ensayar IgM en muestras de suero humano con una selectividad y sensibilidad superiores.

El biosensor mostró una magnífica eficacia antiincrustante incluso en el 100% del suero humano, un bajo límite de detección hasta 2,32 pg mL-1, y una precisión aceptable para la evaluación del patrón real en contraste con el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas habitual para la detección de IgM.

Esta técnica de utilización de AL-BSA para ensamblar interfaces de detección antifouling ofreció una técnica de diagnóstico fiable para la detección de una colección de biomarcadores de proteínas en medios orgánicos complicados.
Sangre, sudor y lágrimas: biocompuestos de regolito extraterrestre con aglutinantes in vivo
La frase proverbial “no se puede sacar sangre de una piedra” se utiliza para explicar un trabajo que es prácticamente inimaginable por mucha presión o esfuerzo que se ejerza.

Esta frase es muy adecuada para la primera misión tripulada de la humanidad a Marte, que puede ser probablemente la empresa humana más problemática y tecnológicamente difícil jamás emprendida.

El excesivo valor y la importante demora relacionada con la entrega de cargas útiles al suelo marciano implica que la explotación de las fuentes in situ -junto con la roca inorgánica y el barro (regolito), los depósitos de agua y los gases atmosféricos- podría ser una parte esencial de cualquier misión tripulada al Planeta Púrpura.

Pero hay un importante, pero crónicamente perdido, suministro de fuentes puras que puede – por definición – incluso ser obtenible en cualquier misión tripulada a Marte: la propia tripulación. En este trabajo, descubrimos el uso de la albúmina de suero humano (HSA) -una proteína estándar obtenida del plasma sanguíneo- como aglutinante del regolito lunar y marciano simulado para suministrar los llamados “biocompuestos de regolito extraterrestre (ERB)”.

En esencia, la HSA producida por los astronautas in vivo podría extraerse de forma semicontinua y mezclarse con el regolito lunar o marciano para “sacar piedra de la sangre”, por decirlo de otro modo.

Utilizando una técnica de fabricación sencilla, se han producido ERB a base de HSA y han mostrado resistencias a la compresión tan excesivas como 25,0 MPa. A modo de comparación, el hormigón común tiene a veces una energía de compresión que oscila entre 20 y 32 MPa.

La incorporación de urea -que podría extraerse de la orina, el sudor o las lágrimas de los astronautas- puede mejorar adicionalmente la energía de compresión en más de un 300% en algunas situaciones, y la formulación de mejor rendimiento tiene una energía de compresión media de 39,7 MPa.

Además, revelamos que los HSA-ERB tienen el potencial de ser impresos en 3D, lo que abre una vía potencial de desarrollo extraterrestre utilizando materias primas de origen humano.

El mecanismo de adhesión se investigó y se atribuyó a la reorganización inducida por la deshidratación de la construcción secundaria de la proteína en una comunidad supramolecular de β-hoja densamente unida por hidrógeno, análoga al mecanismo de cohesión de la seda de araña.

A modo de comparación, también se han investigado la seda de araña artificial y la albúmina de suero bovino (BSA) como aglutinantes del regolito, que también podrían producirse en una colonia marciana con futuros desarrollos en la experiencia de la biofabricación.

Fuente :
1. NCBI
2. Gentaur